提出抗體特異性驗證策略

在一項新的研究中，抗體驗證工作小組（International Working Group on Antibody Validation, IWGAV），即一個由在蛋白生物學領(lǐng)域有著不同研究興趣的科學家組成的獨立小組于2016年9月5日宣布在Nature Methods期刊上在線公布了他們開發(fā)出的初步策略來解決抗體特異性、功能性和可重復性方面至關(guān)重要的未被滿足的需求。IWGAV旨在為抗體制造者和使用者進行抗體驗證而提出策略建議。

盡管抗體在科學研究中是zui為頻繁使用的工具之一，但是還沒有一種綜合的科學框架用于驗證不同研究應用中的抗體特異性。由于失敗的或不可靠的實驗，據(jù)估計，僅僅在美國，對未得到充分描述的抗體的使用花費了3.5億美元，而在*，花費了8億美元。

論文通信作者、IWGAV主席、瑞典*理工學院微生物學教授Mathias Uhlén博士說，“這次公布是開發(fā)被廣泛接受的用于驗證抗體和確保適合于生物醫(yī)學研究的高質(zhì)量的始終如一的抗體的標準方面邁出的重要的*步。我們期待接受來自更廣泛的抗體用戶、發(fā)行者、資助機構(gòu)和制造者的反饋以便有助強化這種初始提出的策略和確保這些必需的生物醫(yī)學研究工具的可靠性。”

IWGAV鑒定出5個“概念支柱（conceptual pillar）”來指導在特定研究應用中的抗體驗證：
（1）基因策略：測量對照細胞或組織中的相關(guān)信號，其中在對照細胞或組織中，利用CRISPR/Cas或RNAi等技術(shù)對靶基因進行敲除（knock out）或敲降（knock down，即降低靶基因表達）。

（2）正交策略：在多種樣品中使用一種與抗體無關(guān)的定量方法，然后研究基于抗體的定量方法與抗體無關(guān)的定量方法之間的關(guān)聯(lián)性。

（3）獨立抗體策略：使用兩種或以上識別靶蛋白上不同抗原決定簇的抗體，然后通過比較性的和定量的分析來證實抗體特異性。

（4）標記蛋白表達：對內(nèi)源性靶基因進行修飾，加入一個親和標簽或一種熒光蛋白。來自標記蛋白的信號能夠與基于抗體的方法的檢測結(jié)果相關(guān)聯(lián)。

（5）免疫免疫捕獲后進行質(zhì)譜分析：偶聯(lián)免疫捕獲，即通過與一種靶蛋白特異性的抗體的結(jié)合從溶液中分離出靶蛋白，然后通過質(zhì)譜分析鑒定出與這種抗體直接相互作用的蛋白，以及可能與靶蛋白形成復合物的蛋白。

盡管上述的每個概念支柱都可能提供抗體特異性的證據(jù)，但是IWGAV推薦使用多個概念支柱來聲稱一種特定的抗體在一種特定的應用中得到很好地驗證。這項新的研究也包括建議抗體制造者和使用者在一段時間后確?？贵w的可重復性。

這種初步提出的策略旨在提供一種用于抗體驗證的科學基礎(chǔ)，和提供鼓勵廣泛地采用關(guān)于抗體使用的綜合指導方針的可重復性標準。然而，這將需要來自研究人員和抗體制造者的持續(xù)反饋。這些利益相關(guān)者將無一不在采用和執(zhí)行這種初步提出的策略中發(fā)揮著重要的作用。