單克隆抗體雙夾心ELISA檢測偽狂犬病病毒的研究

用純化的Min-A株偽狂犬病 病毒（PRV）免疫兔子和昆明鼠，制備高免血清并提純IgG。兔抗PRV高免血清瓊擴效價為1：32，純化兔抗PRV IgG蛋白含量為7.34mg/ml；鼠抗PRV高免血清瓊擴效價為1：16，純化鼠抗PRV IgG蛋白含量為5.74mg/ml。 復蘇本實驗室研制并保存的分泌抗偽狂犬病病毒單克隆抗體雜交瘤細胞OH6，按常規(guī)方法制備腹水、提純IgG，并重新對其作了鑒定。該雜交瘤細胞的平均染色 體數(shù)目為94條；建立了檢測單抗的間接ELISA方法，雜交瘤細胞培養(yǎng)上清和腹水單克隆抗體的ELISA效價分別為1：1000和1：200000；該株 單抗在有無補體參與下均具有中和活性，中和效價分別為1:64和1:16；該株單抗具有良好的特異性，與PRRSV、HCV、PPV不發(fā)生交叉反應(yīng)。 利用所制備的兔抗PRV IgG和McAb建立了檢測PRV的“單克隆抗體雙夾心ELISA”。兔抗PRV IgG包被濃度為4.59ug/ml（1：1600倍稀釋），McAb的工作濃度為6.45ug/ml（1：800稀釋）。該檢測方法特異、靈 敏、可靠、方便、快捷；與動物試驗、病毒分離和中和試驗符合率較高；zui低病毒檢出量為200ng/ml；整個操作過程僅需4.5h（不包括包被）；建立了 科學的判定標準；該方法不需要特殊設(shè)備和技術(shù)，便于推廣。通過對人工兔病料和自然發(fā)病豬病料的檢測研究，發(fā)現(xiàn)扁桃體和腦是PRV檢測器官。