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細(xì)胞因子的溶解和裝配貯存方法

更新時間:2022-06-24 點擊量:2461
  細(xì)胞因子一般通過結(jié)合相應(yīng)受體調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化和效應(yīng),調(diào)控免疫應(yīng)答。是由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。以非特異性方式發(fā)揮生物學(xué)作用,主要參與免疫反應(yīng)和炎癥反應(yīng),影響反應(yīng)的強(qiáng)度和持續(xù)時間的長短,涉及感染免疫,腫瘤免疫,自身免疫,移植免疫等。
  細(xì)胞因子溶解方法:用去離子水或其它緩沖液(根據(jù)說明書要求進(jìn)行選擇)溶解至說明書要求的濃度(一般為0.1-1.0mg/mL,如10ug的產(chǎn)品,需用10uL-100uL的去離子水或緩沖液溶解)。溶解時不可振蕩,避免因化學(xué)鍵的斷裂造成蛋白失活,可加入適當(dāng)?shù)娜軇┹p搖并靜置一段時間,待細(xì)胞因子*溶解后使用。溶劑的選擇:要求用去離子水溶解的產(chǎn)品,務(wù)必不可用鹽溶液,避免過高的鹽濃度造成蛋白不可逆的析出;要求用鹽溶液溶解的產(chǎn)品,請依照說明書上的濃度,同樣也是為了避免過高的鹽濃度。
  細(xì)胞因子的分裝和貯存:蛋白溶解后可根據(jù)自己的實驗需要進(jìn)一步稀釋成工作液,稀釋可用RPMI1640、DMEM或PBS等溶液,其中最好含有5-10%的FCS或0.5%的BSA來穩(wěn)定蛋白。工作液在4℃可保存1周,如需長期保存,則需分裝凍存于-20℃。分裝時每管中工作液的體積最好是一次實驗的用量,以實現(xiàn)每次實驗用完一只工作液,避免反復(fù)凍融引起蛋白活性的降低。
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